хиругия операция

Внимание!
Лечение спаечной болезни!  подробнее

О ФИРМЕ

 

ПРОДУКЦИЯ

 

ЗАКАЗ

 

ПРАЙС  

 

СТАТЬИ  

 

  МЕДИЦИНСКИЕ УСЛУГИ  

 

КОНТАКТЫ
 

Противоспаечный гель "Мезогель"
Грудные импланты компании "Arion"
Медицинская одежда IguanaMed
Сетчатые эндопротезы для лечения грыж
Шовный материал (рассасывающийся)
Шовный материал (нерассасывающийся)

ПРОДУКЦИЯ>Мезогель> экспериментальные исследования
 

  электронограмма клетка
Рис.1 Электроннограмма внутренней волосковой клетки из базального отдела улитки интактной морской свинки
1- стереоцилии
2- кутикулярная пластинка
3- митохондрии
4- опорные клетки
5- ядро

волосковая клетка улитки митохондрия электонная микроскопия
Рис.2 Электроннограмма наружной волосковой клетки из апикального отдела улитки интактной морской свинки
1- ядро
2- митохондрии
3- опорные клетки
4- эфферентное нервное окончание
5- синаптическая область

эпителиальная клетка электронная микроскопия фото
Рис.3 Электроннограмма участка замещения наружных волосковых клеток из базального отдела улитки крупными опорными и кубическими эпителиальными клетками
1- крупные опорные клетки
2- кубические эпителиальные клетки
3- ядро Кэк

стереоцилии гентамицин тугоухость глухота
Рис.4 Электроннограмма внутренней волосковой клетки из базального отдела улитки после введения гентамицина в буллу
1- стереоцилии
2- кутикулярная пластинка
3- вакуолизированные митохондрии
4- опорные клетки

булла среднее ухо улитка фото
Рис.5 Электроннограмма наружной волосковой клетки из среднего отдела улитки после введения гентамицина в буллу
1- субповерхностная сеть
2- стереоцилии
3- кутикулярная пластинка
4- митохондрии
5- опорные клетки

гель кмц электронная фотография
Рис.6 Электроннограмма внутренней волосковой клетки из базального отдела улитки после введения геля Na-КМЦ в буллу
1- стереоцилии
2- кутикулярная пластинка
3- митохондрии
4- опорные клетки

электронная фото микроскопия уха строение улитки
Рис.7 Электроннограмма наружной волосковой клетки из базального отдела улитки после введения геля Na- КМЦ в буллу
1- ядро
2- митохондрии
3- опорные клетки
4- эфферентное нервное окончание


 
  Экспериментальное исследование геля Мезогель при местном применении в среднем ухе: электронно-микроскопическое исследование ототоксичности.

Е.В. Ильинская(1), К.Д. Юсифов(2), В.Е. Кузовков(1), Д.А. Вербицкий(3), В.А. Макарьин(3), И.И. Чернушевич(1)

1 ФГУ "СПб НИИ уха, горла, носа и речи Росздравсоцразвития"
(Директор- засл. врач РФ, проф. Ю. К. Янов)
2 ГОУ ДПО " Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования Росздравсоцразвития"
(Зав. каф. высоких технологий в оториноларингологии и логопатологии - засл. врач РФ, проф. Ю. К. Янов)
3 ГОУ ВПО " Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия"
(Ректор - проф. В. В. Леванович)

Послеоперационные рубцово-спаечные изменения в барабанной полости являются частым осложнением (15-67%) слухоулучшающих операций и при этом служат причиной снижения функционального результата хирургического лечения [3,4,10,13]. В настоящее время для профилактики рубцово-спаечных процессов в барабанной полости используются различные протекторы из инертных и биологических материалов (силикон, аллохрящ и другие), механизм действия которых основан на отграничении поврежденных поверхностей слизистой оболочки. При этом всегда имеется риск смещения протектора с поврежденной поверхности, неудобство его применения в анатомически узких и труднодоступных участках барабанной полости, а также необходимость повторного хирургического вмешательства для удаления протектора в отдаленном послеоперационном периоде [6,7,12,13,14].

В последнее время в литературе появились патогенетически обоснованные данные об эффективности кальцийсвязывающих препаратов в профилактике рубцово-спаечных процессов [1].
Одним из кальцийсвязывающих препаратов является гель Мезогель, который в настоящее время успешно применяется для профилактики спаечной болезни в абдоминальной хирургии [1,11].
По внешнему виду противоспаечный гель представляет собой вязкую прозрачную массу, бесцветную или желтоватого цвета, имеющую однородную структуру. Гель действует как искусственный временный "баръер" между поврежденными поверхностями, обеспечивая их временное разделение, а затем рассасывается. В исследованиях in vitro и in vivo доказано, что препарат после контакта с поврежденными тканями активно связывает ионы кальция, которые необходимы для процесса образования фибрина, который, в свою очередь, является основой для соединительно-тканных сращений [1].
Так как в литературе нет сведений о применении данного препарата в среднем ухе и его влиянии на внутреннее ухо, целью настоящего исследования явилось изучение возможной ототоксичности Мезогеля в эксперименте.

В задачу исследования входило определение влияния геля Мезогель на рецепторные образования внутреннего уха животных методом электронно-микроскопического исследования спирального органа.

Материалы и методы исследования:
В эксперименте использовались половозрелые самцы морских свинок весом 350 - 500 гр.. В соответствии с целью и задачей исследования были сформированы 2 группы животных. В I группу (основная) включено 15 особей, а во II группу (сравнение)- 7 особей.

В I группе каждой особи в правую и левую буллы однократно вводилось по 0,1 мл геля Мезогель. Во II группе каждой особи в правую и левую буллу однократно вводился раствор гентамицина 40 мг/мл по 0,1 мл. Все препараты вводились в буллы путем тимпанопункции под операционным микроскопом фирмы "Carl Zeiss" с использованием общего обезболивания (пары эфира).
Через 6 недель после введения препаратов все животные под общим обезболиванием (2 % рометар в/м, пары эфира) были декапитированы, а выделение костных улиток из полости черепа производили по методу Я.А. Винникова [2] для электронно-микроскопического исследования спирального органа.
С целью контроля результатов электронно-микроскопического исследования, по вышеописанной методике произведено умерщвление и выделение костных улиток у 5 интактных морских свинок.
Выделенный матеpиал погружали в фиксирующий раствор. С момента декапитации до погружения материала в фиксатор проходило не более 5 минут.
Фиксацию проводили в течение 1 часа в растворе 3% глутаральдегида на 0,1М какодилатном буфере и постфиксировали (после предварительной промывки в буфере) в 1% растворе четырехокиси осмия (OsO4) 1 час на том же буфере. Затем после промывки в буфере материал последовательно проводили в спиртах возрастающей концентрации. В 70° спирте производили выделение спирального органа из костной улитки. После заливки в смесь эпоксидных смол и изготовления ультратонких срезов на ультратоме LKB материал анализировали в просвечивающем электронном микроскопе JEM-100S.

Результаты исследования:
Электронно-микроскопический анализ всех отделов улиток (базального, среднего, апикального) интактных морских свинок показал, что в улитковом канале на базилярной мембране отчетливо виден комплекс рецепторных и опорных клеток - спиральный орган. Среди слуховых рецепторных волосковых клеток на поперечных срезах определялась одна внутренняя и три наружные волосковые клетки. Внутренние волосковые клетки отличаются яйцевидной формой, имеют небольшую апикальную область и значительное расширение площади клетки в области ядра и базальной части. Над апикальной поверхностью клетки видны стереоцилии, длина которых убывает по направлению к модиолусу. Цитоплазма внутренних волосковых клеток выглядит электронно-плотной. Органоиды распределены в клетке неравномерно. Под апикальной цитоплазматической мембраной располагается кутикулярная пластинка, имеющая большую электронную плотность по сравнению с остальной цитоплазмой. В кутикулярной пластинке располагаются корешки стереоцилий. В цитоплазме под кутикулярной пластинкой видны скопления митохондрий, единичные небольшие липидные гранулы и фрагменты шероховатой эндоплазматической сети. Ядро имеет округлую форму с одним или двумя ядрышками, а хроматин распределен в нем, преимущественно, равномерно. В околоядерной области располагаются диктиосомы и группы митохондрий, контактирующие с цистернами эндоплазматической сети и с субповерхностной сетью, которая под плазматической мембраной визуализируется в виде 1 - 3 слоев. Базальная область клетки контактирует с афферентными нервными окончаниями. В цитоплазме этой области также локализованы митохондрии, а свободных рибосом здесь больше, чем в других областях (рис.1).

Наружные волосковые клетки на электроннограммах выглядят более светлыми по сравнению с внутренними волосковыми клетками. От апикальной области отходят стереоцилии, корешки которых "заякорены" в кутикулярной пластинке, располагающейся под апикальной цитоплазматической мембраной. На ряде срезов в апикальной области наружных волосковых клеток можно видеть сферические мембранные образования, так называемые, тельца Гензена. Митохондрии, как и во внутренних волосковых клетках, преимущественно, располагаются тремя группами: одна группа локализована в цитоплазме апикального отдела клетки под кутикулярной пластинкой, другая группа располагается в околоядерной зоне и третья - в базальной области клетки. Нередко наблюдаются контакты митохондрий с цистернами шероховатой эндоплазматической сети и с субповерхностной сетью. Округлые ядра наружных волосковых клеток, локализованные в нижней трети клетки, содержат мелкодисперстный хроматин и одно или два ядрышка. Субповерхностная сеть наружных волосковых клеток, в отличие от внутренних волосковых клеток, представлена в виде 5- 9 слоев, число которых уменьшается к базальному полюсу клеток, а в области синаптических контактов и вовсе отсутствуют. Наружные волосковые клетки образуют синаптические контакты с афферентными и эфферентными нервными окончаниями. В местах этих контактов цитоплазма данных клеток содержит синаптические тельца и скопления пресинаптических пузырьков (рис.2).

Таким образом, выявлено, что рецепторные волосковые клетки спирального органа интактных животных имеют полностью сохранные органоиды, а их ультраструктура свидетельствует об активном функциональном состоянии клеток.
Электронно-микроскопический анализ всех отделов улиток (базального, среднего, апикального) животных II группы, которым в буллы был введен гентамицин, показал отсутствие всех трех рядов наружных волосковых клеток в базальном отделе, а на их месте обнаруживались опорные клетки. Обнаруженные опорные клетки более округлой формы и несколько крупнее, чем в норме, а их цитоплазма электронно-светлая с небольшим количеством органоидов. Следует отметить, что многие митохондрии в обнаруженных опорных клетках были вакуолизированы и часть из них имела нарушения наружной митохондриальной мембраны. В некоторых участках выявлено замещение этих крупных опорных клеток на кубические эпителиальные клетки меньшего размера с цитоплазмой большей электронной плотности, богатой органоидами и целостными митохондриями небольших размеров с электронно-плотным матриксом (рис.3).

Внутренние волосковые клетки присутствовали в базальном отделе улиток, но состояние их ультраструктуры существенно отличалось от таковой нормальных клеток. Цитоплазма содержала многочисленные вакуоли, выглядела разреженной как из-за меньшей электронной плотности цитозоля, так и вследствии уменьшения общего количества органоидов. Подавляющее большинство митохондрий было вакуолизировано, кристы разрушены, а у некоторых органоидов наблюдалось нарушение целостности наружной митохондриальной мембраны. Часть цистерн аппарата Гольджи и эндоплазматической сети были расширены (рис.4).

Для среднего отдела улиток характерно было присутствие всех типов рецепторных клеток.
Представленная здесь ультраструктура внутренних волосковых клеток несколько отличалась от таковой интактных животных. Нарушения отмечены только со стороны митохондрий, многие из которых были вакуолизированы или имели разрывы наружной мембраны. Состояние наружных волосковых клеток имело черты глубокой деструкции. Цитоплазма многих клеток была крайне разрежена, практически лишена органоидов, а субповерхностные мембраны располагались в виде рыхлой сети, отслоившейся от цитолеммы (рис.5). Ближе к апикальной области улитки возрастало количество наружных волосковых клеток с меньшей степенью повреждений.

В апикальных отделах улиток животных, в буллы которых вводился гентамицин, присутствовали все рецепторные клетки. Однако, как во внутренних, так и в наружных волосковых клетках наблюдались нарушения некоторых органоидов. Минимальные изменения обнаруживались во внутренних волосковых клетках и касались митохондрий, среди которых некоторые были вакуолизированы. В наружных волосковых клетках наряду с вакуолизированными митохондриями имелись незначительные расширения цистерн шероховатой и гладкой эндоплазматической сети с одновременным увеличением количества свободных рибосом.

Таким образом, установлено, что гентамицин вызвал изменения в рецепторном эпителии на всем протяжении улитки, причем особенно существенные повреждения затронули ее базальный отдел, где на месте наружных волосковых клеток обнаружены только эпителиальные клетки, а у внутренних волосковых клеток имелись нарушения ультраструктуры всех органоидов.
При электронной микроскопии всех отделов улиток (базального, среднего и апикального) животных I группы, которым в буллы был введен гель Na-КМЦ, на ультраструктурном уровне не обнаружено каких-либо отклонений от нормы. В спиральном органе на всем протяжении присутствовали все рецепторные и опорные клетки. Их ультраструктура не отличалась от таковой интактных животных. У внутренних и наружных волосковых клеток, во всех отделах улиток, наблюдалась целостность всех цитоплазматических органоидов. Клетки на момент фиксации находились в активном физиологическом состоянии, о чем свидетельствовало распределение органоидов в цитоплазме и их взаимное расположение. В обоих типах рецепторных клеток митохондрии были расположены, преимущественно, тремя группами: под кутикулярной пластинкой, в околоядерной зоне и в базальной области клеток, обеспечивая энергией активное функционирование клетки (рис.6, рис.7).

Таким образом, выявлено, что рецепторные волосковые клетки спирального органа животных I группы, которым в буллу был введен гель Мезогель имеют полностью сохранные органоиды, а их ультраструктура свидетельствует об активном функциональном состоянии клеток.

Выводы:

Гель Мезогель, при введении в полость среднего уха не обладает ототоксическим воздействием на рецепторный аппарат внутреннего уха, в связи с чем, его введение в барабанную полость с профилактической целью является безопасным.

Список литературы:

1. Вербицкий Д. А. Применение геля карбоксиметилцеллюлозы для профилактики спайкообразования в брюшной полости: автореф. дис. …канд. мед. наук / Д. А. Вербицкий.- СПб., 2004.- 19 с.
2. Винников Я. А. Кортиев орган / Я. А. Винников, Л. К. Титова.-Л.: Акад. Наук СССР,1961.-260 с.
3. Вишняков В.В. Отдаленные результаты тимпанопластики / В. В. Вишняков // Современные проблемы заболеваний верхних дыхательных путей и уха: мат. научн.- практ. конф..- М., 2002.- С. 80 - 81.
4. Гречко А. Т. Фармакологическая коррекция быстродействующими адаптогенами хирургической травмы при реконструктивных операциях на среднем ухе / А. Т. Гречко, Л. А. Глазников, Г. А. Кочергин // Оториноларингология на рубеже тысячелетий: мат. XVI съезда оториноларингологов РФ.- CПб.: РИА-АМИ,2001.-С.65-67.
5. Ильинская Е.В. Электpонно-микpоскопическое исследование ототоксической модели / Е.В. Ильинская //15 съезд отоpинолаp.РФ: [Матеp.]:в 2-х томах. -СПб., 1995.- Т.1.- С. 167-170.
6. Профилактика рефиксации стремени у больных с фиброзирующими процессами в среднем ухе / Ю. К. Янов, В. П. Ситников, И. А. Аникин и др. // Современные аспекты и перспективы развития оториноларингологии: всеросс. науч.-практ. конф., М.- 2005.- С.45-46.
7. Тарасов Д. И. Заболевания среднего уха / Д. И. Тарасов, О. К. Федорова, В. П. Быкова.-М.: Медицина, 1988.-288с.- ISBN 5- 225-00196-3.
8. Юсифов К.Д. Экспериментальное исследование геля натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы при местном применении в среднем ухе: электрофизиологическое исследование ототоксичности / К.Д. Юсифов, В.А. Макарьин // Росс. оторинолар.-2007.-№1.-С.186-189.
9. Babu SC. Otologic effects of topical mitomycin C: phase I - evaluation of ototoxicity // SC. Babu , JM. Kartush, A. Patni // Otol. Neurotol.- 2005.- Vol.-26.-I.-2.- P.140-144.-ISSN 1531-7129.
10. Effect of adhesion on the acoustic functioning of partial ossicular replacement prostheses in the cadaveric human ear / D.P. Morris, L. Wong, R.G. van Wijhe et al. // J Otolaryngol.- 2006.-Vol.35, N1.-P.22-25.-ISSN 0381-6605.
11. .Intraperitoneal sodium carboxymethylcellulose administration prevents reformation of peritoneal adhesions following surgical lysis / S.H. Wurster, V. Bonet, A. Mayberry et al. // J. Surg. Res. - 1995. - Vol.59, N1.- Р.97-102.-ISSN 0022-4804.
12. Liening D.A. Comparison of polydioxanone and silicone plastic in the prevention of adhesive otitis media in the Mongolian gerbil / D.A. Liening, J. H. McGath, L. McKinney // Otolar. Head and Neck Surgery. - 1995. - Vol.112, №2. - P. 303 - 307.
13. Ng M. Long-term effects of Silastic sheeting in the middle ear / M. Ng, FH Jr. Linthicum // Laryngoscope. -1992.-Vol.102, N10.-P.1097-1102.-ISSN 0023-852X.
14. Puterman M. Gelfoam plug tympanoplasty concomitant with removal of retained ventilation tubes / M. Puterman, A. Leiberman // Int. J. Pediatr. Otorhinolaryngol. 2005.- Vol. 69, N1.-P. 57-60.-ISSN 0165-5876.
15. Takumida M. Sensory hair fusion and glycocalyx changes after gentamycin exposure in the guinea pigs / M. Takumida, J. Wersall, D. Baqqer-Sjoback // Acta Otolaryngol. Suppl.-1989.-Vol.457.-P.78-82.
16. Topical application of mytomycin C to the middle ear is ototoxic in the gerbil / M.W. Moody, H. Lang, A.C. Spiess et al. // Otol. Neurotol.-2006.-Vol.27, N8.-P.1186-1192.-ISSN 1531-7129.
17. Waddington C. Treatment of conductive hearing loss with ossicular chain reconstruction procedures / C. Waddington, A.T. Mc Kennis, A. Goodlett // AORN J.-1997.-Vol.65, N3.-P.511-515.-ISSN 0001-2092.


 


Яндекс цитирования
© 2004-2016 Все права принадлежат ООО МегаМед
Копирование материалов допускается только с согласия администрации сайта.
полезные ссылки:
ARION имплантаты АРИОН | Увеличение груди | Паховая грыжа у детей | МЕЗОГЕЛЬ | Медицинская одежда IguanaMed | Компрессионное белье после маммопластики | осмотический экспандер OsMed |